多肽修饰过程中常采用总体缩合策略、单元构建策略以及天然化学连接

　　多肽修饰过程中，通常采用总体缩合策略、单元构建策略以及天然化学连接。针对修饰过程中肽链的缩合与不同的修饰化基团的结构之间相互影响，常采用不同的策略。
 

　　1)总体缩合策略
 

　　总体缩合策略，是指将已制备的多肽链与目标修饰剂催化结合，以避免肽链延长过程中所用试剂对修饰剂与肽段连接效率的影响。以糖肽为例，在缩合过程中，先分别合成多肽和寡糖，再将多肽受体与寡糖供体缩合形成N-或O-糖肽。
 

　　此策略可避免肽链延长过程中酸性去保护条件对O-糖苷键的影响。但是直接糖基化肽链中的丝氨酸或苏氨酸还存在着很大的困难，尝试了在树脂上的固相糖基化反应，合成采用端基连接烯丙基氨基甲酸酯的乙酰基保护葡萄糖，与树脂上连有苏氨酸残基的三肽发生反应，Pd催化切除后，发现以64%收率回收原料，而产物总收率只有4%。目前此策略主要应用在糖基和天冬酰胺相连的N-链接糖肽中。
 

　　2)单元构建策略
 

　　单元构建策略是指先制备不同修饰基团的单元，再将逐个单元催化耦合。在糖基化修饰过程中，由于氨基酸与糖之间的糖苷键在肽链延长之前已形成，位点与立体选择较易控制，目前已成为合成的常用方法，特别适用于固相合成法和合成含有多个糖基的糖肽。
 

　　此策略需预先在液相中合成糖基化氨基酸，已研制出葡萄糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺、GlcβGlc、Man、拟糖物、核糖等与天冬酰胺相连接的构建单元。
 

　　引进微波技术合成Fmoc-L-Asn(GlcAc4)，缩合时间从16～24h缩短至5min(100W，70℃)，极大地方便了N-糖肽的合成。在策略的选择上，采用Fmoc固相合成策略研究磷酸化血管紧张素Ⅱ的合成，选择N，N-二乙基-二叔丁氧基亚磷酰胺为磷酸化试剂。
 

　　总体磷酸化法选用侧链羟基未保护的酪氨酸作为固相合成的单体进行肽的合成。磷酸化单体Fmoc-Tyr(PO3But2)-OH为单体进行肽的合成。
 

　　采用总体磷酸化法和磷酸化单体法都得到了所需要的磷酸化血管紧张素Ⅱ。采用总体法不但能够得到磷肽，而且也得到了非磷酸化的多肽，但是磷酸化效率低，产率约为17%，粗品肽较难分离。
 

　　而单体法提供了更为直接的合成步骤，合成效率更高，副产物较少，而且产率可达到38%，因此认为合成包含磷酸化酪氨酸的多肽采用磷酸化单体法更好。